技術(shù)研究

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    穿心蓮獸醫(yī)藥理學(xué)的研究
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          穿心蓮[Andrographis paniculata(BurmF)Nees]為爵床科穿心蓮屬植物,別名欖核蓮、一見喜、印度草、斬蛇劍、苦草、四方草、圓錐須藥草等。原產(chǎn)于印度,我國華南、西南、華東等地均有栽培,其味苦,性寒,歸肺、胃、大腸、小腸經(jīng),具有清熱解毒,消腫止痛的作用。 
      1 穿心蓮的化學(xué)成分 

      王國才等[1]用各種色譜方法對穿心蓮葉中的活性成分進(jìn)行分離純化,根據(jù)理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)鑒定化合物的結(jié)構(gòu),從穿心蓮葉中分離得到6個(gè)化合物,分別鑒定為8-甲基新穿心蓮內(nèi)酯苷(8-methylandrograpanin,Ⅰ)、3-脫氫脫氧穿心蓮內(nèi)酯(3-dehydrodeoxyandrographolide,Ⅱ)、新穿心蓮內(nèi)酯苷元(andrograpanin,Ⅲ)、8(17),13-ent-labdadien-l5-l6-lactone-19-oic acid(Ⅳ)、 谷甾醇(Ⅴ)和胡蘿卜苷(Ⅵ)。其中化合物Ⅱ和Ⅲ為新天然產(chǎn)物,化合物Ⅳ和V為首次從該植物中分離得到[2-3]。 

      2 穿心蓮藥材的色譜指紋圖譜的建立 

      張尊建等[4]應(yīng)用Shimadzu VP-ODS柱,1 g/L甲酸乙腈與2 mL/L甲酸進(jìn)行梯度洗脫,流速為1。0 mL/min,檢測波長254 nm,柱溫為室溫,建立穿心蓮藥材的HPLC-UV色譜指紋圖譜,標(biāo)示了9個(gè)共有峰。應(yīng)用HPLC-MS技術(shù)對其7個(gè)主要色譜峰進(jìn)行了初步歸屬,并對不同產(chǎn)地藥材的色譜指紋圖譜進(jìn)行了相似度評(píng)價(jià),為其質(zhì)量控制提供了依據(jù)。 

      3 穿心蓮對動(dòng)物體生理功能的影響 

      3。1 穿心蓮對肉雞淋巴細(xì)胞活性和白細(xì)胞吞噬功能的影響 

      胡宇莉等[5]應(yīng)用淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)和白細(xì)胞吞噬白色葡萄球菌的吞噬指數(shù),觀察了不同制劑穿心蓮對肉雞淋巴細(xì)胞活性和白細(xì)胞吞噬功能的影響,結(jié)果表明穿心蓮在整個(gè)給藥周期內(nèi),對吞噬率均有顯著提高作用(P<0。05);穿心蓮在后期能顯著提高白細(xì)胞吞噬指數(shù)(P<0。05);試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)穿心蓮在給藥的中后期可顯著提高淋巴轉(zhuǎn)化率及活性(P<0。05)。 

      3。2 穿心蓮對肉雞體液免疫的影響 

      胡宇莉等[6]研究了不同劑型、不同劑量穿心蓮對肉雞體液免疫的影響。對肉雞的新城疫病毒血凝抑制反應(yīng)(HI)抗體滴度、血清總補(bǔ)體溶血活性、血清球蛋白含量進(jìn)行了測定。試驗(yàn)結(jié)果表明,穿心蓮能顯著提高肉雞的新城疫病毒HI抗體水平及血清球蛋白含量(P<0 05="" p="">0。05)。 

      王友令等[7]研究了穿心蓮對新城疫病毒HI抗體滴度的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn),穿心蓮能顯著提高肉雞的新城疫HI抗體水平。另外,穿心蓮的抗體水平有一定的劑量依賴性,隨著劑量的提高效果有提高的趨勢。 

      3。3 穿心蓮內(nèi)酯對小鼠RAW264。7巨噬細(xì)胞呼吸爆發(fā)和Balb/c小鼠淋巴細(xì)胞增殖的影響 

      劉峻等[8]分別用化學(xué)發(fā)光法和Alamar blue染色法考察新穿心蓮內(nèi)酯對佛波豆蔻酸乙酯刺激的小鼠巨噬細(xì)胞呼吸爆發(fā)及植物凝集素刺激的Balb/c小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖的影響,結(jié)果表明新穿心蓮內(nèi)酯在75 μmol/L~150 μmol/L濃度范圍內(nèi)對刺激的巨噬細(xì)胞呼吸爆發(fā)及淋巴細(xì)胞增殖有抑制作用,而在1。5 μmol/L~7。5 μmol/L濃度范圍內(nèi)可協(xié)同刺激劑引起的呼吸爆發(fā)。反映出新穿心蓮內(nèi)酯在高濃度時(shí)具有抗炎活性,而低濃度時(shí)具有免疫刺激活性,提示其可能具有雙向調(diào)節(jié)功能。 

      3。4 新穿心蓮內(nèi)酯抑制活化巨噬細(xì)胞產(chǎn)生 

      有報(bào)道對ICR小鼠腹腔內(nèi)注入卡介苗(BCG),4 d后收集腹膜巨噬細(xì)胞。在含1 mg/mL~10 mg/mL LPS培養(yǎng)液培養(yǎng),觀察穿心蓮對卡介苗(BCG)誘導(dǎo)的小鼠腹膜巨噬細(xì)胞經(jīng)脂多糖(LPS)刺激產(chǎn)生NO的抑制作用。結(jié)果表明, 活性成分穿心蓮內(nèi)酯和新穿心蓮內(nèi)酯濃度依賴性(0。1 μmol/L~100 μmol/L )抑制NO產(chǎn)生,。其IC50分別為7。9 μmol/L和35。5 μmol/L。 口服新穿心蓮內(nèi)酯5 mg/kg和25 mg/kg對NO產(chǎn)生的抑制率分別為35%和40%,而口服相同劑量的穿心蓮內(nèi)酯不抑制NO產(chǎn)生。說明新穿心蓮內(nèi)酯在穿心蓮抗炎作用中起關(guān)鍵作用。 

      4 穿心蓮的藥代動(dòng)力學(xué) 

      穿心蓮水提物灌服家兔(1。6g生藥/kg),以穿心蓮內(nèi)酯為檢測指標(biāo),用化學(xué)發(fā)光法對穿心蓮內(nèi)酯的血藥濃度進(jìn)行檢測,求得其主要的藥動(dòng)學(xué)參數(shù):Ka=1。343 h±0。08 h,kl2= 0。336 h±0。01 h,K2l=0。633 h±0。06,Tαl/2=0。692 h±0。07 h,T β1/2=12。12 h±1。9 h,AUC =501。1 g/mL/h±9。8。給家兔灌服4 g穿心蓮水煎液24 h后,采用有機(jī)偶合化學(xué)發(fā)光法對幾個(gè)主要臟器中所含穿心蓮內(nèi)酯進(jìn)行測定,心、肝、腎中的藥物含量分別為0。43、2。03、4。56 μg/g。穿心蓮膠囊與穿心蓮?fù)杞?jīng)大鼠灌胃給藥后(均為3。8g生藥/kg),用Re-HPLC法測定穿心蓮內(nèi)酯的血藥濃度, 求得主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)分別為:Cmax為2。23 mg/L和1。08 mg/L,Tmax為0。57 h和0。96 h,AUC0-24 h 為8。39 g/mL/h和3。94 g/mL/h。采用藥理效應(yīng)法,選擇大鼠炎癥模型進(jìn)行了穿心蓮的藥動(dòng)學(xué)研究[9]。結(jié)果表明,其體存生物相當(dāng)藥量的表現(xiàn)藥動(dòng)學(xué)過程符合二室模型,其Tα=0。734 h-1 ,K10=0。030 h-1,t1/2Ka =0。944 h,t1/2α=0。956h,t1/2β=24。869 h,AUC=95。001 g/mL/h。 

      5 穿心蓮的毒副作用 

      穿心蓮根總黃酮給小鼠靜注LD50為(1。15±0。28)g/kg,穿心草(SA)酮給小鼠腹腔注射最大耐受量為>300 mg/kg。亞急性毒性實(shí)驗(yàn),穿心蓮內(nèi)酯lg/kg灌服,每日1次,連續(xù)7 d,對大鼠或家兔無明顯毒性。穿琥寧注射液84 mg/kg腹腔注射每日1次,連續(xù)10 d,對大鼠無毒性作用。但是超大劑量穿心蓮內(nèi)酯可影響肝功。 


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